TheJournalofClini

本期遗传学与整合组学课题组为大家带来的是年3月份发表在TheJournalofClinicalInvestigation的“PlasminogenasaprognosticbiomarkerforHBV-relatedacute-on-chronicliverfailure”一文，在乙型肝炎病毒相关性急性慢性肝衰竭(HBV-ACLF)中采用TMT的LC-MS/MS技术进行发掘和DIA-MS和PRM-MS技术验证，发现证实纤溶酶原是HBV-ACLF的一个潜在的预后生物标志物。

一

研究背景

乙型肝炎病毒相关性急性慢性肝衰竭(HBV-ACLF)的特点是短期死亡率高，需要准确的预后生物标志物来进行初步风险分层。因此，需要能够进行早期准确风险分层的生物标志物。此外，ACLF是一个高度动态的过程；因此，肝衰竭患者病程的生物标志物进行连续评估可能会加强对ACLF患者的管理。然而，现阶段还没有生物标志物能够评估这一过程。

二

简介

TMT定量蛋白质组学证实纤溶酶原是HBV-ACLF的一个潜在的预后生物标志物，并在横断面队列中得到初步验证。进一步的前瞻性队列验证显示，未存活的乙肝病毒携带者入院时的纤溶酶原水平显著低于存活者。高纤溶酶原水平患者的生存期明显低纤溶酶原水平患者。此外，存活患者的纤溶酶原水平逐渐升高，而死亡患者的纤溶酶原水平逐渐下降。P5评分是一个包含纤溶酶原水平、肝性脑病发生、年龄、国际标准化比率(INR)和总胆红素的预测方法，明显优于Child-Pugh，终末期肝病模型(MELD)，慢性肝衰竭联合会ACLF(Clif-CACLF)，中国重型乙型肝炎研究小组(COSSH)，以及HINT(基于肝性脑病发生情况、INR、中性粒细胞计数和促甲状腺激素的预后评分)。

三

实验思路

四

研究结果

在串联质谱标记蛋白质组学实验1、2和3中总共鉴定了种蛋白质（图1）。使用低于0.05且相差1.5倍或更多的FDR过滤器，作者在HBV相关AHD(HBV-AHD)和HBV-ACLF患者中确定了个差异蛋白（DEP）（图1）。正如预期的那样，这些患者可以在基于DEP整体表达趋势的无监督聚类分析中被区分（图1）。GO富集分析表明，DEPs的分子功能主要与补体活性、蛋白酶抑制剂活性和转运蛋白活性有关，而主要的生物学过程涉及蛋白质代谢、免疫反应和能量通路，细胞定位主要位于细胞外成分、外泌体和溶酶体中。肝细胞核因子-1α（HNF-1α）、雌激素相关受体α（ESRRα）和核受体亚家族4组A成员2（NR4A2）被预测为HBV-ACLF患者DEP相关的上游转录因子（图1）。蛋白质印迹分析显示，与慢性乙型肝炎(CHB)、HBV相关肝硬化(LC)、HBV-AHD或HBV-ACLF患者相比，健康对照(HC)中HNF-1α的水平逐渐降低（图1）。

图1

蛋白质组学数据的生物信息学分析

为了验证HNF-1α和纤溶酶原之间的转录联系，作者观察到用HNF-1αsiRNA处理的HepG2细胞中纤溶酶原剂量依赖性抑制。此外，通路富集分析显示DEP在补体和凝血级联反应、胆固醇代谢和金黄色葡萄球菌感染中过多（图2）。此外，与HBV-AHD患者相比，那些富含补体和凝血级联反应的DEP在HBV-ACLF幸存者中下调，并在HBV-ACLF非幸存者中进一步下调（图2）

图2

KEGG富集到的通路

在HBV-AHD和HBV-ACLF患者之间的个DEP中，与幸存者相比，HBV-ACLF非幸存者中有14个下调，2个上调3）。多变量主成分分析(PCA)显示这些候选生物标志物清楚地区分了HBV-AHD患者、HBV-ACLF幸存者和HBV-ACLF非幸存者（图3）。我们建立了有监督的正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型来识别可以区分HBV-ACLF患者与HBV-AHD患者以及HBV-ACLF非幸存者与幸存者的蛋白质特征（图3）。纤溶酶原、色素上皮衍生因子(SERPINF1)、清道夫受体富含半胱氨酸的1型蛋白M(CD)、补体因子B(CFB)、凝血因子IX(F9)、激肽原-1(KNG1)和补体因子I(CFI)对区分HBV-ACLF幸存者和非幸存者做出了最大的贡献（预测中的预测变量重要性[VIPpred]1）。

图3

候选生物标志物的PCA和OPLS-DA分析

在VIPpred大于1的7个候选生物标志物中，肝脏特异性蛋白纤溶酶原、CFB、F9、KNG1和CFI在横断面队列中得到验证（如图4），这5种蛋白水平随乙肝病情加重而降低(均P0.)。重要的是，ACLF死亡组的纤溶酶原和CFI水平明显低于存活组(P0.05)，而CFB和F9水平在死亡组有降低的趋势(P均0.10)。在横断面队列中，纤溶酶原和CFI预测急性肝功能衰竭预后的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.(0.-0.)和0.(0.-0.)。纤溶酶原在前瞻性纵向HBVACLF队列中的验证。鉴于纤溶酶原在初步验证中被认为是最有希望的预后生物标志物（如图4），我们接下来

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